Anhang II REG_2025_652 – „E 960b(i) REBAUDIOSID M AUS FERMENTATION DURCH YARROWIA LIPOLYTICA

Im Anhang der Verordnung (EU) Nr. 231/2012 wird nach dem Eintrag für den Lebensmittelzusatzstoff E 960a folgender Eintrag eingefügt:

Synonyme

Definition Rebaudiosid M aus Fermentation durch Yarrowia lipolytica besteht aus einer Mischung aus Steviolglycosiden, deren Hauptbestandteil Rebaudiosid M ist, mit etwas Rebaudiosid D und kleineren Mengen an Rebaudiosid A und Rebaudiosid B. Die Herstellung erfolgt in zwei Hauptphasen. Die erste Phase umfasst die Fermentierung einer Einfachzuckerquelle durch einen nichttoxigenen, nichtpathogenen Stamm von Yarrowia lipolytica, der mit heterologen Genen genetisch verändert wurde, um die an der Synthese von Steviolglycosiden beteiligten Gene zu überexprimieren, um so den Stamm VRM (CBS 147477) zu erhalten. Nach Entfernen der Biomasse durch Fest-Flüssig-Trennung und Wärmebehandlung erfolgt die Konzentration der Steviolglycoside. Die zweite Phase umfasst die Reinigung durch Ionenaustauschchromatografie mit anschließender Kristallisierung der Steviolglycoside aus Ethanol mit einem Endprodukt, das mindestens zu 95 % aus den Rebaudiosiden M, D, A und B besteht. Im Lebensmittelzusatzstoff dürfen keine lebensfähigen Zellen und DNA von Yarrowia lipolytica VRM nachgewiesen werden.

Chemische Bezeichnung Rebaudiosid A: 13-[(2- O-β-D-Glucopyranosyl-3-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranosyl)oxy]-kaur-16-en-18-säure-β-D-glucopyranosylester Rebaudiosid B: 13-[(2- O-β–D-Glucopyranosyl-3-O-β–D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranosyl)oxy]-kaur-16-en-18-säure Rebaudiosid D: 13-[(2- O-β-D-Glucopyranosyl-3-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranosyl)oxy]-kaur-16-en-18-säure-2-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranosylester Rebaudiosid M: 13-[(2- O-β-D-Glucopyranosyl-3-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranosyl)oxy]-kaur-16-en-18-säure-2-O-β-D-glucopyranosyl-3-O-β-D-glucopyranosyl-β-D-glucopyranosylester

Chemische Formel Trivialname Formel Konversionsfaktor

Rebaudiosid A C 44H70O23 0,33

Rebaudiosid B C 38H60O18 0,40

Rebaudiosid D C 50H80O28 0,29

Rebaudiosid M C 56H90O33 0,25

Molmasse und CAS-Nr. Trivialname CAS-Nummer Molmasse (g/mol)

Rebaudiosid A 58543-16-1 967,01

Rebaudiosid B 58543-17-2 804,88

Rebaudiosid D 63279-13-0 1 129,15

Rebaudiosid M 1220616-44-3 1 291,30

Gehalt mindestens 95 % Rebaudiosid M, Rebaudiosid D, Rebaudiosid A und Rebaudiosid B in der Trockenmasse.

Partikelgröße höchstens 0,5 % der Partikel kleiner als 300 nm (mittels RTEM)

Beschreibung weißes bis hellgelbes Pulver, etwa 200- bis 350-mal süßer als Saccharose (bei 5 % Sucroseäquivalent).

Merkmale

Löslichkeit mäßig löslich in Wasser

pH-Wert 4,5-7,0 (Lösung 1 zu 100)

Reinheit

Asche insgesamt höchstens 1 %

Trocknungsverlust höchstens 6 % (105 °C, 2 Stunden)

Lösungsmittelreste höchstens 5 000 mg/kg Ethanol

Kaurensäure höchstens 0,3 mg/kg (gemessen mittels Flüssigchromatografie-Massenspektrometriedetektion)

Arsen höchstens 0,01 mg/kg

Blei höchstens 0,01 mg/kg

Cadmium höchstens 0,01 mg/kg

Quecksilber höchstens 0,05 mg/kg

Mikrobiologische Kriterien

Gesamtzahl der (aeroben) Keime höchstens 1 000 KBE/g

Hefen und Schimmelpilze höchstens 100 KBE/g

Escherichia coli in 1 g nicht nachweisbar

Salmonella spp. in 25 g nicht nachweisbar

Restproteingehalt höchstens 20 mg/kg“

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